プレイヤーキャラクター
1人プレイではマリオのみ。
マルチプレイでは1Pが自動的にマリオとなって、2~4Pはマリオ以外のキャラクターを選んでプレイする。
- マリオ
CV:チャールズ・マーティネー
主人公。
今回も様々なアクションで冒険する。
- ルイージ
CV:チャールズ・マーティネー
マリオの弟。
マルチプレイで2P以降使用可能。
おてほんプレイでは彼が案内役を務める。
- きいろキノピオ・あおキノピオ
CV:チャールズ・マーティネー
多数のキノピオから選ばれた精鋭部隊。
マルチプレイで2P以降使用可能。
サポートキャラクター
- ヨッシー
CV:サウンド音声
乗る事ができ、クリボーなどの敵を食べる事が出来る。
ノコノコなどのマリオたちでは踏んだだけでは倒せない敵も、踏みつけるだけで倒す事が出来る。
口に含んだものによってアクションが違ってくる。
ふんばりジャンプで滞空時間を長くするアクションも可能。
敵キャラクター
- ピーチ姫
CV:サマンサ・ケリー
キノコ王国の姫。
クッパ軍団にさらわれてしまう。
悪役キャラクター
- クッパ
クッパ軍団の首領。
ワールド8のクッパ城のボスで、ラスボス。
- クッパJr.
クッパの息子。
ピーチをさらった張本人。
ワールド4・6・8の飛行船のボス。
- クッパの手下(コクッパ7人衆)
- ラリー
- ロイ
- レミー
- ウェンディ
- イギー
- モートン
- ルドウィッグ
- カメック
クッパの手下。
魔法でコクッパ達を援護する。
ワールド8では砦のボスとしてマリオ達と戦う。