メインキャラクター
- マリオ
主人公。
ピーチ姫を救うための、新たな冒険へ旅立つ。
- ルイージ
マリオの弟。
「ふたりであそぶ」のモードではマリオとともに協力しながら、新たな冒険へ出発する。
「ひとりであそぶ」でも、ある条件をクリアするとプレイできる。
- ピーチ姫
キノコ王国の姫。
クッパたちにさらわれてしまう。
- クッパ
クッパ軍団の首領。
ピーチ姫をさらおうと企む。
- クッパの手下(コクッパ7人衆)
- ロイ
- イギー
- ラリー
- ウェンディ
- モートン
- レミー
- ルドウィッグ
サブキャラクター
- キノピオ
ピーチ姫に仕える臣下。
キノピオの家では、様々なアイテムがある家、1UPキノコが貰える家がある。